Generell information

Studien syftade till att öka kunskapen om hur immunsvaret fungerade i luftvägarna och huden, med det långsiktiga målet att utveckla antiviral behandling mot luftvägsburna patogener (RSV) och lindra allergiska sjukdomar i lungorna eller huden. Eftersom luftvägarna och huden ständigt utsätts för patogener och allergener, är ett snabbt och potent immunsvar absolut nödvändigt. Hypotesen var att både nedärvt (innata) och specifikt (adaptivt) immunsvar måste aktiveras lokalt för att försvara oss mot infektioner och allergier. Försöksledaren har funnit ett DNA-fragment (ssON) som förhindrar transporten av flera olika virus in i celler vilket därmed förhindrar infektion av nya celler. Genom att stänga inkörsporten, som virus föredrar, med hjälp av ssON, tvingas virus ta sig in via andra dörrar. Därmed kan immunsvar också få en bättre möjlighet att reagera mot virus och bekämpa det.

Ansökan hade två syften;

1. att studera immunsvar och virusnivåer i samband med Respiratoriskt syncytialvirus (RS-virus, RSV) infektion med eller utan behandling med anti-RSV läkemedel (ssON, anti-RSV antikroppar och andra immunmodulerade ämnen/läkemedel).
2. att studera effekt av nya Toll-Like Receptor 3 (TLR3) antagonister som specifikt kan dämpa överaktiva TLR3-svar in vitro. Man avsåg att utvärdera deras effekt in vivo i möss. Först genom lokal behandling i hud och sedan även efter systemisk behandling.

Uppgifter som enligt beslut av den regionala djurförsöksetiska nämnden ska beaktas/besvaras vid utvärderingen av djurförsök i efterhand.

• Andel/antal möss som nått avbrytningspunkt och anledning till detta.
  Svar: 5 möss nådde avbrytningspunkt 0.3 p.g.a. kraftig klåda och inflammation i huden efter applicering av TLR agonist (allergi/psoriasis modell). Inga djur infekterade med RSV nådde avbrytningspunkt då det är en mild infektion hos möss som läker ut efter några dagar. En annan mus nådde avbrytningspunkt av okänd anledning då det fanns ingen tydlig orsak till varför musen ej var frisk.
• Grader av lungpåverkan hos möss som infekterats med virus.
  Svar: Vi använde tillsynsschemat för att upptäcka andningspåverkan och observerade extra noga andningen om den var tyngre eller snabbare. Vi hade inte en exakt gradering av lungpåverkan kliniskt, men har data på relativa virusnivåer analyserade med IVIS (data i form av Flux(P/S) från ett luciferas-inmärkt virus). Vi utvärderade infektion med 4 olika virusdoser och mätte Flux både i näsa och lungor med IVIS. Högre virusnivåer ger ofta större lungpåverkan. Flux i lunga som mått på grad gav värden från bakgrund upp till 4x106 Flux(P/S).
• Har tillsynsschemat varit tillräcklig för att upptäcka svår andningspåverkan i tid.
  Svar: Ja, troligtvis.

Antal sökta djur och antal använda djur

Ansökan omfattade 2400 möss, varav 957 användes. Projektet omfattade inte någon avel.

Bedömning av svårhetsgrad

I ansökan föreslogs att den högsta svårhetsgraden kunde bedömas som avsevärd. Detta var också den regionala nämndens bedömning.

Måluppfyllelse

Man valde att fokusera på inflammationsmodellerna p.g.a. mycket lovande resultat och därför genomfördes inte så många virusförsök som planerades.
En oligonukleotid identifierades, som rekryterar monocyter till huden. Den har förmågan att lugna ner T-hjälparceller och istället inducera regulatoriska T-celler. Dessutom visades, i en allergi/psoriasis modell, att möss som behandlas med oligonukleotiden läker ut fortare och har färre Th17-celler, vilka bidrar till sjukdom vid eksem och psoriasis.
Man hade goda behandlingseffekter mot klåda vid behandling med en TLR3-antagonist löst i en kräm.
Resultaten har publicerats i en internationell vetenskaplig tidskrift.

3R

I framtida försök kan man tänka sig att i stället för att avliva djur för att ta hudbiopsier vid olika tillfällen för att mäta lokala immunsvar, kan ny minimalt invasiv provtagning av interstitial hudvätska användas för att utvärdera kinetik.
Man betonar vikten av att använda så låg dos virus som möjligt i samband med infektion. En lämplig dos virus måste titreras ut för varje virus-stock.
En reducerad inflammationsgrad i huden i en allergi/psoriasis modell kunde fås genom att förkorta försöksupplägget. Detta har publicerats.
IVIS-försök för att detektera virusinfektion fungerade väldigt väl och därigenom kunde antalet djur minskas då man kunde mäta virusnivåer över tid i samma djur istället för att behöva avliva djuren för att mäta virusnivåer.

Övriga kommentarer

-

Etablerad rapportstandard